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微生物菌種活化就是將保藏狀態(tài)的菌種放入適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，逐級擴大培養(yǎng)是為了得到純而壯的培養(yǎng)物，即獲得活力旺盛的、接種數(shù)量足夠的培養(yǎng)物。菌種發(fā)酵有一般需要2-3代的復壯過程，因為保存時的條件往往和培養(yǎng)時的條件不相同，所以要活化,讓菌種逐漸適應培養(yǎng)環(huán)境。菌種活化是指將長期保存的菌種恢復到具有生長活力的狀態(tài)，以便于進一步的培養(yǎng)和使用。根據(jù)菌種的保存方式，活化方法可以分為以下幾種：
1. 凍干粉或載體保存形式的活化：
首先，將凍干粉或載體保存的菌株加入少量生理鹽水或非選擇性肉湯培養(yǎng)基中進行溶解懸浮。
使用劃線或涂布方式接種至平板，或吸取菌液至液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。
2. 甘油凍存或液體保存形式的活化：
在室溫下快速融化，然后進行劃線或涂布接種至平板，或直接加入到液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。
3. 瓷珠形式的活化：
挑取單個瓷珠在平板上滾動數(shù)次或直接加入到液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。
4. 斜面或半固體形式的活化：
直接挑取菌苔轉(zhuǎn)接至平板或液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。
5. 具體操作步驟：
準備培養(yǎng)基：根據(jù)菌種類型選擇合適的培養(yǎng)基，如胰酪大豆胨液體/瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯/瓊脂培養(yǎng)基等。
活化過程：
1) 第一代活化：從凍存管或斜面挑取菌種，接種至固體斜面或液體培養(yǎng)基，在適宜溫度下靜置培養(yǎng)（如細菌37℃, 24小時）。
2) 擴大培養(yǎng)：將活化的菌液按1%5%接種量轉(zhuǎn)移至新鮮液體培養(yǎng)基，搖床振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期。
注意事項：嚴格無菌操作，超凈臺酒精燈旁接種；若菌株生長緩慢，可延長培養(yǎng)時間或添加特定生長因子。
6. 復蘇凍干菌株：
開啟產(chǎn)品包裝：先用70%酒精棉擦拭外包裝，再打開使用。
復活：選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進行復活，第1次活化最好在非選擇性瓊脂培養(yǎng)基上進行。
傳代次數(shù)：凍干菌株的傳代次數(shù)不得超過5代。
7. 工作菌株確認：
1）、使用無菌接種環(huán)在相應的培養(yǎng)基平板上劃線分離單個菌落，置適宜條件下培養(yǎng)。
2）、觀察菌落狀態(tài)，挑取單一純菌落，進行革蘭染色、鏡檢，確認菌種。
通過這些方法，可以有效地活化并復蘇微生物菌種，確保其在后續(xù)實驗中的活力和純度。
